复习:生物化学第三章-蛋白质分离鉴定
- 2026-10-08 05:24:07
这一章看着杂，其实是一条闭环：性质（第一节）决定用什么原理去分离纯化（第二节），分完必须能鉴定纯度与分子量（第三节）。
下面三节各留一张主表 + 几个必考点，标注了「变性 / 不变性」——这是本章最容易混、也最爱考的一条线索。
第一节｜蛋白质的性质
| 条件 | 净电荷 | 电场中的行为 |
|---|---|---|
| pH = pI | ||
| pH > pI | ||
| pH < pI |
溶解度：清蛋白最高，硬蛋白最低。
大小：单体 → 寡聚 → 多聚。
形状：球形溶解度最高，椭球形、细棒状次之，纤维状溶解度差。
胶体稳定的两个原因：① 分子表面水化层阻止分子彼此靠近；② 同种蛋白分子带同种电荷互相排斥。
推论：破坏水化层，或使溶液处于 pH = pI，蛋白质即沉淀——这正是第二节的前两种分离手段。
| 概念 | 要点 |
|---|---|
| 抗原 | |
| 半抗原 | |
| 抗原决定簇 | |
| 抗体 | |
| 一抗 / 二抗 |
基于抗原—抗体结合的四项技术：
| 技术 | 标记物 | 用途 |
|---|---|---|
| 定位 | ||
第二节｜蛋白质的分离和纯化
| 方法 | 原理 | 性质 | 用途 |
|---|---|---|---|
| 等电沉淀 | 不变性 | ||
| 盐溶 | 不变性 | ||
| 盐析 | 不变性 | ||
| 变性 | |||
| 变性 | |||
| 变性 |
| 方法 | 原理 | 性质 | 用途 |
|---|---|---|---|
| 透析 | 不变性 | ||
| 超滤 | 不变性 | ||
| 密度梯度离心 | 不变性 | ||
| 凝胶过滤层析 | 不变性 |
先把一个前提记住：电泳迁移率与分子质量、分子形状、电荷性质三者都有关。后面几种电泳，本质都是在"想办法只留一个变量"。
| 方法 | 分离依据 | 性质 | 要点 |
|---|---|---|---|
| PAGE | 不变性 | ||
| 等电聚焦 IEF | 不变性 | ||
| 双向电泳 | 不变性 | ||
| 离子交换层析 | 不变性 |
亲和层析靠的是蛋白与特异配基专一、可逆的结合，优点是快速、高效、纯度高。常见配基对：抗原—抗体、底物—酶、糖—凝集素、核酸—核蛋白。
另一路是吸附层析：利用介质表面活性基团对流动相中不同组分吸附性能的差异分离。常见两类——羟基磷灰石层析、疏水作用层析（适合易复性蛋白的分离）。
第三节｜蛋白质的鉴定
| 方法 | 测的是什么 | 性质 | 原理要点 |
|---|---|---|---|
| SDS-PAGE | 亚基 | 变性 | |
| 凝胶过滤法 | 天然 | 非变性 | |
| 沉降速度法 | 非变性 |
SDS-PAGE 求分子质量三步：
凝胶过滤法的公式：以洗脱体积 Ve 对分子质量作图，标准曲线为 lgM = K₁ − K₂ · Ve/V₀。其中 V₀ 是外水体积，由"完全不能进入网孔的大分子"测得。大分子 Ve 小、小分子 Ve 大，所以 Ve/V₀ 越小，分子越大。
| 技术 | 步骤 | 能做什么 |
|---|---|---|
| Western blot | 定性 | |
| ELISA | 定性 |
| 方法 | 原理 | 特点 |
|---|---|---|
| 凯氏定氮法 | ||
| 双缩脲反应 | ||
| Folin-酚反应 | ||
| 考马斯亮蓝结合反应 | ||
| 紫外吸收法 |
可用手段：沉降、蛋白质末端分析、色谱、电泳——实验里最常看的是 SDS-PAGE 条带。
| 结果 | 判读 |
|---|---|
| 单条带 | |
| 多条带 |
全章那条暗线：变性 or 不变性
把这一列单独拎出来，本章一半的易错点就没了。点标签切换看：
分离纯化：等电沉淀、盐溶、盐析、透析、超滤、密度梯度离心、凝胶过滤层析、PAGE、等电聚焦、双向电泳、离子交换层析、亲和层析、吸附层析。
鉴定：凝胶过滤法、沉降速度法是非变性的，测的是天然分子质量。
一句话：只要不靠"破坏结构"来分离，就都在这一栏——这也正是"保活性"要求的由来。
考前速记：这一章的数字与关键词
这份《第三章 蛋白质分离鉴定》思维导图，直接送你
写在后面
第三章比第二章好背，但更容易"记混"——因为方法太多，名字又像。
我的建议是：不要横向背方法名，纵向背"依据"。先问自己"这个方法是按溶解度分，还是按大小分，还是按电荷分"，四个框一归位，剩下的就是小细节。
下一章进入酶，我们接着往下过。1732，一起上岸。
1732 · 一起上岸
