PCR上岗证考试题含答案及历届真题
一、选择题（共 20 题，每题 2 分）
1、在核酸提取时,常需使用氯化钠、醋酸钠等盐溶液,其目的是:(A)
A 中和核酸的负离子,使其易于沉淀
B 调节 PH 值 C 保证核酸的完整性
D 无特定目的
2、临床上使用核酸扩增方法诊断沙眼衣原体感染,在标本收集上最为关键的是 (B)
A 标本的采取方式
B 标本的保存方式
C 标本的运送方式
D 标本采取的时间
3、之所以要将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态,目的是:(B)
A 防止生物传染危险物的逸出
B 防止扩增产物从该区进入上游区域
C 防止该区灰尘的逸出
D 无特殊目的
4、核酸提取纯化中, Rnase 最主要的潜在污染源是:(D)
A 实验室环境
B 实验用品如吸头、离心管等
C 实验人员的手 D 以上 A 和 B
5、PCR 方法检测病原微生物所扩增的区段,一般为:(B)
A 整个病原体基因组
B 病原体基因组内的保守区域
C 病原体基因组内的任一区域
D 以上都不是
6、无创产前基因诊断为胎儿做出基因检测,需从孕妇外周血中分离获取及少量 的:(B)
A 孕妇有核红细胞
B 胎儿有核红细胞
C 白细胞 D 以上均可
7、临床 PCR 测定的重复性不好的原因如下,但除外:(B ）
A 试剂盒核酸提取方法对扩增抑制物去除不干净
B 标准品浓度不准
C 核酸扩增仪空间温度不均
D 加样重复性差
8、有关于动力学定量 PCR 方法中对扩增效率的测定,下述哪一条是错误的:(B ）
A 必须在扩增的指数期内测定
B 可在扩增的任何阶段进行
C 与扩增产物的测定有关
D 尽可能多选几个测定点
9.临床基因扩增检验的室内质量控制与通常的临床定性免疫测定 IQC 的最大不 同在于:(D)
A 弱阳性质控血清的设置
B 强阳性质控血清的设置
C 阴性质控血清的设置 D 以上均是
10、PCR 技术扩增 DNA,需要的条件是( A )
①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸
④DNA 聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体
A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥
11、镁离子在 DNA 或 RNA 体外扩增反应的浓度一般为（ D ）
A、0.3-1mmol/L B、0.5-1mmol/L
C、0.3-2mmol/L D、0.5-2mmol/L
12、多重 PCR 需要的引物对为（ D）
A、一对引物 B、半对引物
C、两对引物 D、多对引物
13、PCR是在引物、公众号“医检星空”模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于 DNA 聚合酶 的酶促合成反应，其特异性决定因素为（ B）
A、模板 B、引物 C、dNTP D、镁离子
14、在 PCR 反应中，下列哪项可以引起非靶序列的扩增的扩增( C )
A、TaqDNA 聚合酶加量过多
B、引物加量过多
C、A、B 都可
D、缓冲液中镁离子含量过高
15、PCR 技术的发明人是（A ）
A、Mullis B、史蒂文.沙夫 C、兰德尔.才木
16、PCR 产物短期存放可在（ A ）保存。
A、4℃ B、常温 C、-80℃ D、高温
17、PCR 产物长期储存最好置于（ D ）。
A、4℃ B、常温 C、16℃ D、-20℃
19、PCR 的基本反应过程包括（A ）
A、变性、退火、延伸 B、变性、延伸 C、变性、退火
20、在实际工作中，基因扩增实验室污染类型包括( D )
A、扩增产物的污染
B、天然基因组 DNA 的污染
C、试剂污染和标本间交叉污染
D、A、B、C 都可能
21、PCR 技术于哪一年发明（ A ）
A、1983 B、1971
C、 1987 D、1993
22、Taq DNA 聚合酶酶促反应最快最适温度为（C ）
A、37℃ B、50-55℃
C、70-75℃ D、80-85℃
23、以下哪种物质在 PCR 反应中不需要（ D ）
A、Taq DNA 聚合酶 B、dNTPs
C、镁离子 D、RNA 酶
24、PCR 检测中，经过 n 个循环的扩增，拷贝数将增加（ C ）
A、n B、2n
C、2nD、n2
25、PCR 基因扩增仪最关键的部分是（ A ）
A、温度控制系统 B、荧光检测系统
C、软件系统 D、热盖
26、以下哪项不是临床 PCR 实验室设计的一般原则（ A ）
A、各区合并 B、注意风向
C、因地制宜 D、方便工作
27、PCR 实验室一般包括( D )
A、试剂准备区 B、标本制备区
C、扩增区和产物分析区 D、A、B、C 都含
28、PCR 技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。公众号“医检星空”若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用 PCR 扩增血液中的 （D）。
A、白细胞 DNA B、病毒蛋白质
C、血浆抗体 D、病毒核酸
29、如果反应体系中加入模板 DNA 分子 100 个，则经过 30 个循环后，DNA 分子 的数量将达到（ D ）个。
A、100×30 B、100×30×2
C、100×302 D、100×230
30、PCR 扩增产物的分析方法主要有（ D ）
A、凝胶电泳分析法 B、点杂交法
C、荧光探针定量 PCR 法 D、A、B、C 都是
二、判断题（共 20 题，每题 2 分）
1、PCR 引物设计的目的是在扩增特异性和扩增效率间间取得平衡。（√ ）
2、在 PCR反应中，dATP 在 DNA 扩增中可以提供能量，同时作为 DNA 合成的原料。 （√ ）
3、DNA 扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板 DNA 解旋。（√ ）
4、PCR 反应中，复性过程中引物与 DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则 完成。（√ ）
5、PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高。（√ ）
6、PCR 技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等。（√ ）
7、PCR 技术需在体内进行。（×）
8、PCR 反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体液。（√）
9、核酸的复制是由 5＇——→ 3＇方向进行的。（√）
10、配对的碱基总是 A 与 T 和 G 与 C。（√）
11、HBsAg 转阴性后一段时间才出现可检测的 HBsAb，此段间隔期称之为“窗口 期”。（√）
12、市面上多数试剂用淬灭基团 Q 基团和报告基团 R 基团来标记荧光定量 PCR 的探针。（√）
13、PCR 反应体系中 Mg2+的作用是促进 Taq DNA 聚合酶活性。（√） 14、若标本中含有蛋白变性剂（如甲醛），PH、离子强度、Mg2+等有较大改变都会影响 Taq 酶活性。（√）
15、每个子代 DNA 分子中均保留一条亲代 DNA 链和一条新合成的 DNA 链，这种 复制方式称之为半保留复制。（√）
16、发生溶血的标本对 PCR 结果没影响。（×）
17、“平台效应”是描述 PCR 后期循环产物对数累积趋于饱和。（√）
18、逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription-PCR，RT-PCR）就是在应 用 PCR 方法检测 RNA 病毒时，以 RNA 为模板，在逆转录酶的作用下形成 cDNA 链，然后以 cDNA 为模板进行正常的 PCR 循环扩增。（√）
19、在定量 PCR 中，72℃这一步对荧光探针的结合有影响，故去除，实际上 55℃ 仍可充分延伸，完成扩增复制。（√）
20、PCR 可应用于遗传病、肿瘤及病原体检测三大方面（√）
三、简答(共两题，每题 10 分)
1、PCR 技术
答：PCR 技术是用一对寡聚核苷酸作为引物（要点 1：2 分），通过高温变性、 低温退火、中温延伸（要点 2：5 分）这一周期的多次循环，使特异的 DNA 片段 数量指数倍数增加（要点 3：3 分）。
2、简述定量 PCR 检测操作的全过程。
答：标本的采集，保存（2 分）——→样品前处理（2 分）——→待样品充分裂 解后点样上机反应（2 分）——→反应结束后观察结果（2 分）——→发报告（2 分）
历年考试高频题目
1、新冠标本运送与接收人员要求（20%）
a. 从事样本运送、接收的人员应经过生物安全培训、个人防护用品穿戴及相关 消杀培训并考核合格。 b. 运送人员个人防护装备要求：工作服、医用帽、外科口罩、手套。 c. 实验室接收人员个人防护装备要求：工作服、医用帽、外科口罩或 N95 口罩、 塑胶手套。
2、新冠样本院内运送要求（20%）
1.时限：内部转运时，应采集之后 30min 内运抵实验室，不宜超过 2h 。 2.运送：公众号“医检星空”样本装在密封袋中，置于密闭、坚固、专用有生物安全标识的样本转 运箱中。期间保持转运箱平稳，样本直立不倒，避免剧烈震荡、颠簸。转运箱 封闭前，1000mg/L 含氯消毒剂或 75%乙醇等喷雾消毒。
3、新冠样本的院外运送包装要求（20%）
三层包装系统 ：高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本包装由内到外分别为 主容器、辅助容器和外包装三层包装。 第一层：病毒采样管，悬紧。 第二层：防水和防泄漏容器，采样管外放置吸收性材料，防止液体外渗。 第三层：外层转运包装，具有足够的强度，正置放，短距离运送加冰袋，长距 离需要加干冰。
4、新冠样本的接收要求（20%）
1、建立样本接受和拒收标准，详细核对样本信息，做好交接登记。 2、在专用样本接收区接收样本，在开箱瞬间用 75%乙醇喷雾消毒并检查样本的 密闭性; 检查有无液体渗漏现象，公众号“医检星空”确保无渗漏后，放置于样本暂存实验室暂存 待检。 3、如发现渗漏应立即用吸水纸覆盖后，喷洒有效氯含量为 5000 mg/L 的含氯 消毒液进行消毒处理，不得继续检测操作。
5、样本检测前保存条件（20%）
1、用于病毒分离和核酸检测的样本应尽快进行检测，能在24小时内检测的样 本可置于4℃保存；24小时内无法检测的样本则应置于-70℃或以下保存（如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。 2、血清可在4℃存放3 天，-20℃以下可长期保存。 3、应设立专库或专柜单独保存样本。 4、样本应避免反复冻融。
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